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體內藥理學


免疫生物學測試

1、混合淋巴細胞反應

混合淋巴細胞反應(mixed lymphocyte reaction,MLR), 又稱混合淋巴細胞培養,是指兩個無關個體、功能正常的淋巴細胞在體外混合培養時,由于細胞表面HLA-II類抗原D和抗原DP不同,從而可互相刺激對方淋巴細胞轉化,釋放淋巴細胞因子如IL-2等。在抗體藥開發體外功能實驗方案中,通過檢測MLR實驗中釋放的細胞因子量來評價這些抗體分子的活性。

 

DC-T混合淋巴細胞反應中,T細胞活化并釋放細胞因子IL-2、IFN-Γ

 

2、T細胞激活、增殖實驗

T 淋巴細胞的活化是免疫應答的核心,誘導 T 細胞活化、增殖及分化為效應 T 細胞需要雙信號刺激。最常見的用于 T 細胞體外活化的是抗 CD3 抗體 和抗 CD28 抗體,待T細胞活化后,可以通過FACS,ELISA等方法檢測IL-2、IFN-Γ等來確定T細胞活化和增值的狀態。

 

FACS檢測aCD3/aCD28誘導的小鼠T細胞的活化、增殖,包括CFSE峰圖的增加及細胞因子IL-2、IFN-Γ

 

3、T細胞殺傷功能實驗

T細胞介導的細胞毒性是細胞毒性T細胞(CTL)的特性,凡致敏的T細胞再次遇相應靶細胞抗原,可表現出對靶細胞的破壞和溶解作用,它是評價機體細胞免疫水平的一種常用指標,臨床上特別是測定腫瘤患者CTL殺傷腫瘤細胞的能力,常作為判斷預后和觀察療效的指標之一。

 

待測抗體為CD3/CD19 雙特異性抗體; 效應細胞為純化后的CD3+ T 細胞;靶細胞為OCI-LY-19;E:T比為10:1; 共同孵育時間為4小時;

 

4、抗體依賴的細胞毒性實驗ADCC

IgG抗體可介導這些細胞發揮ADCC作用,其中NK細胞是能發揮ADCC作用的主要細胞。在抗體介導的ADCC作用的發生過程中,抗體只能與靶細胞上的相應抗原表位特異性結合,而NK細胞等效應細胞可殺傷任何已與抗體結合的靶細胞,故抗體與靶細胞上的抗原結合是特異性的,NK細胞等對靶細胞的殺傷作用是非特異性的。

 

 

5、補體依賴的細胞殺傷實驗CDC

補體依賴的細胞毒性(complement dependent cytotoxicity;CDC ),是指補體參與的細胞毒作用,即通過特異性抗體與細胞膜表面相應抗原結合,形成復合物而激活補體經典途徑,所形成的攻膜復合物對靶細胞發揮裂解效應。

 

 

6、流式細胞術(FACS)

 

Immune cells

Human

Mouse

B cell

CD19+

CD19+

T Cell

Total T Cell

CD3+

CD3+

Helper T Cell

CD3+, CD4+

CD3+, CD4+

Cytotoxic T Cell

CD3+, CD8+

CD3+, CD8+

Treg

CD4+, CD25+, FOXP3+

CD4+, CD25+, FOXP3+

Dendritic Cell

CD3-, CD11C+,

CD11C+, MHC II+

NK Cell

CD3-, CD56+

CD49B+ (clone DX5)

NKT Cell

CD3+,CD56+

CD3+, CD49B+ (clone DX5)

Macrophage

CD11B+, CD68+, CD163+

F4/80+, CD68+

Monocyte

CD14+, CD33+

CD11B+, CD115+, Gr-1+, Ly-6C+

MDSC

CD11B+, CD33+

CD11B+, F4/80+, Gr-1+

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